当前所在页面：一、紫外灯杀菌效果检查
紫外灯在使用过程中辐射强度会逐渐降低，会影响其杀菌效果，故应该定期检测。紫外灯的杀菌有效波长是253.7 nm,其强度可以用中心波长254 nm的紫外线强度计测定。在没有紫外线强度计的情况下可以采用生物学测试代替。
生物学测试简要步骤如下：选用枯草芽孢杆菌ATCC 9372,制成106CFU/mL~108 CFU/mL浓度的菌悬液；选用经脱脂处理的0.5 cm x 1.0cm大小的布片或铝片，高压灭菌后用作载体；每个载体上滴一滴制备好的菌悬液，干燥后备用；将8个染菌载体放于无菌器皿中，置于紫外灯下1 m~1. 5 m处，开启紫外灯照射，于0.5h、 1 h、 1.5h和2h各取出2个染菌载体，分别投入盛有5ml.缓冲蛋白胨水的洗脱液；系列稀释后进行平板计数；同法取8个染菌载体用做阳性对照，操作除不经紫外线照射外与试验组相同。
杀灭率 =(阳性对照回收菌数-试验组回收菌数)×100% / 阳性对照回收菌数杀灭率大于99.9%时，认为紫外灯杀菌效果合格。
二、无菌室空气质量检查
无菌室空气质量的检查应按照采样计划，根据情况对处于空态、静态或正常运行的风险区，使用适当的仪器采集空气中微生物，测定并监测风险区空气的微生物污染。无菌室空气质量的检查可以参考GB/T 16293 《医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法》和GB/T 25915.7《洁净室及相关受控环境 第7部分：隔离装置(洁净风罩、手套箱、隔离器、微环境)》。
空气悬浮微生物的采样和计数方法多种多样，根据所需采样目的决定具体的采样方法和采样器。因采样器的采集效率不同，应慎重选择合适的方法和设备。
采样器分为两类：被动式采样器，如落菌盘；主动式采样器，如滤过采样器、撞击采样器、冲击采样器等。
1、沉降法
落菌盘等被动式空气微生物采样器不能测量空气中微生物的总数，而是测量空气中微生物在表面的沉降率。只要确定单位时间落菌盘上微生物的数量，再根据落菌盘的暴露面积与暴露时间之间的关系，即可大致计算出空气中微生物的数量。
面积小于30 m2的室内设一对角线取3点，在其中心及两端距墙1 m处各取一点；面积大于30 m2的室内房间四面距墙1 m和中央各放置一个平皿，高度为实验台的高度。培养基平皿开盖暴露10 min,然后盖盖倒放，培养48 h,计数每个平1上的菌落数。
日常监控时，可以设定可接受的菌落数限值。一般无菌室的所有取样平皿上的细菌总数应小于15个。空气质量良好的无菌室，通常每个平皿上生长的细菌不超过2个。
也可以按式(10-2)估算空气中的细菌浓度：
C=（50000 x N ）/ （A × t）.......( 10-2)
式中：
C一空气中的细菌浓度，单位为菌落集成单位每立方米(CFU/m3)；
A--平板面积，单位为平方厘米(cm2)；
t一平板暴露时间，单位为分钟(min)；
N-平均菌落数，单位为每1L (CFU/L)。
2、空气滤过法
空气采样除了自然沉降法外，还可以使用专门的主动式采样器。主动式采样器可以评估 风险区空气微生物特征。主动式采样器主要包括撞击采样器、滤过采样器和冲击采样器等。
撞击采样器可以分为狭缝式采样器、离心式采样器和针孔式采样器。狭缝式采样器由附加的真空抽气泵抽气，通过采样器的缝隙式平板，将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落，予以计数。离心式采样器由于内部风机的高速旋转，气流从采样器前部吸入从后部流出，在离心力的作用下，空气中的活微生物粒子有足够的时间撞击到专用的固形培养条上，经培养后形成菌落，予以计数。
过滤式空气采样器是最常用的、最简单的空气采样器。过滤式采样器由采样头、滤器、流量计和抽气泵组成。
开动电机后，抽气泵工作，带动空气吸入采样头，空气通过滤器的时候，大于滤膜孔径的颗粒就被阻留，当达到预先设定吸气体积后抽气泵停止工作，将滤膜取出转贴到培养基上，培养后计算空气中的微生物浓度。过滤式采样器捕获效率高，但是滤膜材料可能影响微生物的存活率，还有采样阻力大、流量易变的缺陷。
三、无菌室物体表面微生物污染检查
表面微生物污染的检查需要使用接触器或拭子，获得某表面某时间点的微生物数量。
接触器以容器内已知面积的固态营养介质与表面接触，接触面积应大于20 cm2,均匀用力将整个营养介质压住表面几秒钟，不得移动。然后将装置放回容器内，再清洁被采样表面，清除残留营养物。接触器培养后显现的菌落可以给出原表面微生物存活状况的镜像“图”。
使用拭子更为简单和灵活，用拭子擦拭某个表面，它抹去的微生物数量就可计算出了。对接触装置触及不到的、不平或有凹陷的非吸收性大表面，用拭子采样特别方便。棉拭子的操作方法如下：
准备材料：自制无菌棉拭子或购买商品化的无菌棉拭子(见图10-12)、内径10cm x 10 cm无菌规格板、无菌生理盐水、培养基平皿。
如果取样物体是平面的，将无菌规格板放在物体表面，用浸湿的无菌棉拭子在无菌规格板空心处横竖涂抹均匀，涂抹时随之转动棉拭子，剪去棉拭子与手接触部分，将棉拭子放入装有一定体积的无菌生理盐水中待检。
采样管敲打80次以上使棉拭子上的细菌充分扩散，作适当稀释，进行平板计数，37 ℃培养48 h计数，见式(10-3)。
细菌总数(CFU/m2)=（平皿上菌落平均数 × 稀释倍数 ）/采样面积 (cm2).......( 10-2)
【例10.1】某操作台面采样面积100 cm2 ,棉拭子放入10 mL生理盐水，从中取1 mL检测，平皿上平均菌落数为5个。则细菌总数为：
5x10/100=0. 5(CFU/cm2)
如果取样物品表面不规则或者物品采样面积不足100 cm2 ,取整件物品进行棉拭子涂抹取样，其余步骤同上，见式(10-4)。细菌总数(CFU/件) =平皿上菌洛平均数×稀释倍数 / 件.......(10-4)
四、人员接触面无菌检查
人员与检测对象的接触面主要是手。
被检人员洗手消毒后，五指并拢。将浸泡过的棉拭子沿双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次(每只手涂擦面积约30cm2),涂擦的同时转动棉拭子。剪去操作者手接触部位，将棉拭子放入装有一定体积的无菌生理盐水中待检。
按“无菌室物体表面细菌污染检查”的方法进行样品处理、接种、培养、计数和报告结果。
